牛结节性皮肤病抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

【产品名称】

通用名：牛结节性皮肤病抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Lumpy Skin Disease （ELISA）

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】 又称牛疙瘩皮肤病、牛结节疹，是由牛结节性皮肤病病毒（LSDV）引起牛的一种急性、亚急性或慢性传染病。

 本试剂盒用于检测牛血清中牛结节性皮肤病抗体，可用于疫苗免疫效果评价或该病的辅助诊断。

【原    理】

    本试剂盒由预包被牛结节性皮肤病核蛋白抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测牛血清样本中牛结节性皮肤病病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有牛结节性皮肤病病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加 TMB 底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中抗体含的特异性量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在 450nm 波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有牛结节性皮肤病病毒抗体。

【试剂盒组成】 

【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清先按10倍稀释（如在稀释板中加入90μl样品稀释液再加10μl血清，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入样品稀释液90μl，再加入稀释后的血清10μl。

注：样本稀释比例相当于1:100。

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.2，阳性对照≥0.6。

【检验结果的解释】

1.样品的 OD 值即 OD_S；

2.阈值计算：SP 值 =（OD_S-OD_NC）/（OD_PC-OD_NC）；SP 值≥0.2，结果判定为阳性；SP 值＜0.2，结果判定为阴性。

3.本实验结果为阴性时表明牛只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

    该试验仅作为定性检测牛血清中牛结节性皮肤病 IgG 抗体。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。