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描述: TRIzol Reagent 是一种可提取动植物样品中
RNA 的制品。样品在 TRIzol Reagent 中能够充分被裂解,
在样品匀浆或裂解过程中,它可保持 RNA 的完整性,同时
裂解细胞,溶解细胞内含物。TRIzol Reagent 具有很强的广
谱性,可以适用于各种样品的总 RNA 提取,提取过程方便
快速,整个操作在一小时内便可以完成。该试剂可用于小量
样品(50-100 mg 组织、1x106 细胞)也适用于大量样品(≥1g
组织、>107 细胞)。对人、动物、植物组织、细菌均适用,
可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一小时内即可完
成。分离的总RNA蛋白质和 DNA污染极低,可用于Northern
Blot、反转录、ployA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和
基因克隆。
储存:2-8℃避光保存,可保存 2 年。
注意:该试剂含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,
若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验
服,戴手套。
操作方法
自备试剂:氯仿,异丙醇,70%乙醇(DEPC 水配置),Rnase
Free H2O。
Ⅰ 实验前准备:
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用
器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此,在实验中必须
采取以下措施:戴一次性干净手套;使用 RNA 操作专用实
验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止
实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
注意事项:
1. 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前用
0.1%DEPC 水溶液在 37℃处理 12h,然后在 120℃高压灭
30min 以除去残留的 DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60min)
或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装
(也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器),使用的无菌
水须用 0.1%的 DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉
污染。
Ⅱ 实验操