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末端转移酶(TdT)是一种不依赖于模板的DNA聚合酶,催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3’羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子 均可作为TdT的底物,加尾长度可达5~300nt。本酶经电子重构架技术筛选,使其可以在45°C高温下反应,从而避免因DNA二级结构造成的加尾效 率下降。优化的活性中心结构,使其对模板底物结合能力更强,底物加尾比例更高。该末端转移酶(TdT)广泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修饰碱基(如 ddNTP,DIGdUTP)标记DNA 3’末端、TdT介导的dUTP 缺口末端标记技术(细胞凋亡的原位检测)等试验。
组分
组分名称 数量
Terminal Transferase (20 U/μl) 50 μl
10×TdT Buffer 1 ml
应用
寡核苷酸或DNA 3’羟基末端标记
DNA末端加尾(DNA tailing)
5’-RACE
合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链
活性定义
37℃ 60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位
储存
-20℃可保存3年。
热失活
75°C 20min。