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Equi-phi29 DNA Polymerase是phi29的改造体,并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性(>70kb)的基础上,提高了滚环扩增的反应温度,该酶酶可以在42℃条件下持续的进行DNA合成(而phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低)。
这种高温的反应特性,在以下几个方面对实验有明显的提升:
(1)在NGS测序中,其提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力,使得NGS的覆盖度更均一,降低测序所需深度;
(2)高温的反应条件,提升了基因组DNA的WGA产物的合成量,并可以进行变温扩增;
(3)降低测序中Gap区域,提升单细胞测序的数据质量和完整度;
(4)降低非特异性扩增产物;
(5)提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。
此外,Equi-phi29 DNA Polymerase仍然具有很强的3’-5’外切酶校读功能,合成的DNA片段保真性高。该酶的外切酶活性较强,因此合成过程中引物需要3’端硫代修饰,以降低外切活性对引物的切割效应。
主要特征
链置换能力
连续合成能力
扩增的高保真性
应用
DNA恒温滚环扩增
需强链置换和DNA连续合成的反应
质粒快速复制
高保真快速复制
储存
-20℃可保存3年。