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描述：AccurPrime RCA Kit 与 TruePrime RCA Kit 工作原理
相同，采用引发酶（Primase Pol）来产生扩增引物。这种
不使用 Random Hexamers（随机引物）的扩增方式，确保
了对模板的精准扩增，避免引物带入的不确定碱基。Primase
Pol 结合在 ssDNA 上，以 dNTP 为底物合成短的互补引物，
随后在高保真和持续合成能力极强的 Equi-phi29 DNA 聚合
酶的作用下，持续合成 ssDNA，其新合成的 ssDNA 又可以
作为 Primase Pol 的结合底物重新合成互补引物，进而继续
进行扩增，形成 dsDNA。
该试剂盒中配备了 dsDNA 变性液（Buffer D），因此，
无论是 ssDNA 还是 dsDNA 均可以有效的作为扩增底物。以
1 ng 的环状质粒模板，在 2h 内可以获得 3 μg 的扩增产物。
以 10 ng 的 genomic DNA（100-200kb）为模板，可获得
1-2 μg 的产物。扩增终产物为大分子量的网状 dsDNA，其
可用于酶切、测序与再连接。
组分
名称 50T
10×phi29 Buffer 150 μl
Buffer D（变性液） 150 μl
Buffer N（中和液） 150 μl
Equi-phi29 DNA Pol(10U/μl) 50 μl
AccurPrimase Pol 50 μl
10mM dNTP 75 μl
RNase Free H2O 1 ml
储存：-20℃可保存 2 年。

操作方法
1. 模板变性与中和
Template DNA（0.01-10 ng/μl） 2.5 μl
Buffer D 2.5 μl
漩涡混合均匀后，室温放置3min后，立即加入2.5μl Buffer
N 进行中和（此时总体积为 7.5μl）。
注意：（1）模板 DNA 可以是纯化的质粒、gDNA、菌液、
培养细胞。（2）变性反应采用碱变性方法，因此变性时间
不宜超过 5min，过长的时间会造成模板损伤。
2. 扩增反应
步中和产物 7.5 μl
10×phi29 Buffer 2.5 μl
10 mM dNTP 1.25 μl
AccurPrimase 1 μl
Equi-phi29 DNA Pol(10U/μl) 1 μl
RNase Free H2O 11.75μl
Total 25 μl
漩涡混合均匀后，放置于 30℃恒温扩增 2h。必要情况下，
65℃10min 进行失活反应。产物 4℃短期保存（<3 天），
或-20℃长期保存。
注意：过长的孵育时间会增加产物量，但同时可能会导致
非特异扩增。