小鼠端粒酶(TE)Elisa试剂盒特点:
1. 安全、快速、重复性好;
2. 特异性 ,灵敏度超过90%;
3,有48T/96T规格,现货供应,提供免费代测服务;
小鼠端粒酶(TE)Elisa试剂盒组织样本一般制成组织匀浆,处理方法如下:
1.使用干净的工具解剖目标组织,尽快置于冰上,以防被蛋白酶降解。(暂时不处理的组织,置于圆底微量离心管中,浸入液氮中“速冻”,在 -80℃ 下存储样品备用)
2.用预冷的 PBS 缓冲液(0.01M,pH=7.4)洗涤组织去除残留的血液,称重后备用。若组织块较大,需先剪碎。
3.在冰上用研磨缓冲液(常用 PBS 缓冲液,但 使用 50mM Tris+0.9%NaCL+0.1% SDS,PH 7.3。或者中等强度 RIPA 细胞裂解液,注意 RIPA 裂解液 PH 值需为 PH7.3,建议不要使用含 NP-40,Triton X-100 和高浓度 DTT 的组分,会抑制抗原抗体反应。)研磨组织匀浆(加入研磨缓冲液的体积取决于组织的重量。一般情况下,每 1 克组织碎片应使用 9ml 研磨缓冲液。另外建议在研磨缓冲液中加入一些蛋白酶抑制剂,如 1mM PMSF)。得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理(超声破碎过程中,需冰浴降温;反复冻融法可重复 2次)。
4.将制备好的匀浆液于 5000×g 离心 5 分钟,留取上清即可检测。或分装冻存于-20℃或-80℃。
5.根据实验需要,组织匀浆样本可先定量总蛋白,以便于统计分析数据,一般调整总蛋白浓度至 1-3mg/ml。某些组织样本,如肝脏,胰腺因含有较高浓度的内源性过氧物酶, 在样品浓度较高的情况下会和试剂盒底物反应出现假阳性。
小鼠端粒酶(TE)Elisa试剂盒样本
1.细胞培养上清:
1)使用 96,24,6 孔板,(贴壁或悬浮)细胞密度达到 60-90%。
2)使用 6-10mm 培养皿,T25/T75 细胞培养瓶,(贴壁或悬浮)细胞密度达到 60-90%。
3)悬浮细胞:2-8℃,2500rpm 离心 5min,收集澄清的细胞培养上清。
4)贴壁细胞:直接收集上清液,2-8℃,2500rpm 离心 5min,收集澄清的细胞培养上清。
5)立即用于检测,或分装于-80℃冻存备用。
小鼠端粒酶(TE)Elisa试剂盒使用技巧
1.样本的准备:尽量使用新鲜样本,不使用有溶血,被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全的样本。ELISA检测宜采集新鲜标本,如不能立即测定,5天之内应4℃保存,对于1周后检测的样本应低温冻存;做好分装,长时间冻存的样本避免反复冻融。
2.仔细阅读说明书,熟悉整个流程,推荐画出简要步骤图;提前准备试剂,比如常见20X洗涤液是浓缩液,需要用超纯水提前稀释准备好。一般的检测抗体和酶标二抗需要用对应的稀释液稀释至工作浓度。
3.不同批次的试剂不要混用,检查各组分的有效期。
4.预包被的酶标板条和各试剂组份需要室温平衡30 min以上,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需温度,预防后续实验中由于孵育温度或是时间不够充分,而将一些弱阳性样本不能检出。
5.待测样本加样:待检样本过多时,建议分批操作;需要稀释的样本提前做好稀释,注意选对合适稀释液;控制好加样时间,避免加样费时过长造成误差;注意加样角度,垂直加入孔底,不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
6.温育和洗板:温育时间和温度一般根据试剂盒的说明书进行选择。温育时可以采用水浴或者湿盒孵育,避免“边缘效应”。①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅。
7.显色:市售ELISA 试剂盒中,一般是以四甲基联苯胺(TMB)为底物的显色液,反应条件为37℃或室温反应15~30 min。显色反应需要避光。
8.读数和数据分析:终止后读取结果尽量在15min内完成,读取OD值时酶标仪需先预热15~30 min再进行。数据分析一般用四参数和直线拟合法,选择哪种拟合方式,可以依据标曲的相关系数(R2)来确定,R2一般需要大于0.99。
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月更多产品详情联系我们
YS03010B 小鼠缺氧诱导因子(HIF-1)Elisa试剂盒