产品名称：Rotavirus D轮状病毒D群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的PCR试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物等组分经过优化，灵敏度高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他的DNA/RNA发生交叉反应。
5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6.本产品足够50次20μL体系的染料法荧光定量PCR反应。

【操作步骤】详情见使用说明书。

1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
1.2DNA提取
2.试剂配制（试剂准备区）
3.加样（样本处理区）
4.PCR扩增（核酸扩增区）
5.结果分析判定

Rotavirus D轮状病毒D群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒操作方法

1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液， 用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 阳性对照（其浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
2.如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做（可以选4号，其余样品不变）。以下只介绍定量分析的反应设置。

Rotavirus D轮状病毒D群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒注意事项

1所有操作严格按照说明书进行；

2试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3反应液应避光保存；
4反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

Rotavirus D轮状病毒D群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒数据处理：

1 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。
2 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。

Rotavirus D轮状病毒D群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒存储条件

保存条件：-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于7次

有效期：12个月