产品名称：5′-核苷酸酶(5′-NT)检测试剂盒(钼蓝比色法)

实验原理

核苷酸酶(5?-NT)检测试剂盒(钼蓝微板法)的检测原理为5?-核苷酸酶能催化5?-磷酸腺苷(AMP)水解，生成腺苷和磷酸，后者与钼酸铵反应生成钼蓝，可用比色法测定无机磷的含量，计算5?-NT活性。利用镍离子能选择性的抑制5?-NT的特性，在测定管不加人抑制剂镍离子，测出的活性为ALP和5?-NT总活性，在对照管加入镍离子，可以测出ALP的活性，测定管的酶活性减去对照管的酶活性即获得5?-NT活性，通过分光光度计检测680nm处吸光度。5?-核苷酸酶的检测对于研究自由基代谢平衡，机制具有一定的价值。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

5′-核苷酸酶(5′-NT)检测试剂盒(钼蓝比色法)操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

5′-核苷酸酶(5′-NT)检测试剂盒(钼蓝比色法)产品包装图：