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pCMV-SPORT6-PERP(4同义突变)质粒载体说明书
如需该质粒图谱可以联系客服索取,更多质粒请联系我们
亲爱的科研工作者,感谢您信任雅吉生物,我们致力于为大家分享质优价适的质粒,受各种因素影响,我们只保证质粒的关键序列测序正确,不能保证实验效果。请您收到质粒后请务必先转化,再挑取单菌落扩增,不要直接使用。如果您需要即用的大包装质粒或病毒颗粒,可委托我们制备,性价比更高。
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉
产品规格:0.5~2μg质粒干粉,保证能转化出来,不保证具体含量,请务必先转化进感受态,再挑单菌落提取后再使用。
保质期限:90天,请尽快转化。
保存温度:一般在-20°C,置于-80°C保存时间更长。
运输方式:常温运输,1周内。
注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗性、抗性浓度、感受态名称和培养温度。
使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80°C冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100μl上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
注意:如果平板长的过多,请将质粒稀释后再转化;如果没有长菌落,请取10μl质粒转化。
pCMV-SPORT6-PERP(4同义突变)质粒载体
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
产品规格:甘油菌种。
保质期限:90天,请尽快划线培养。
保存温度:-80℃。
运输方式:冰袋运输,1周内。
注意事项:培养前请准确查找该菌种的抗性、抗性浓度和培养温度。
使用说明:
1、收到甘油菌种后请甩动保存管,让菌液不要吸附在管壁上;
2、用接种环在固体平板上四区划线,如有抗性就加对应抗性;
3、恒温培养箱倒置培养12~16h;
4、挑取单菌落接种于液体培养基中,如有抗性就加对应抗性;
5、摇床震荡培养12~16h,根据实验需要保存甘油菌,酵母加30% 甘油,其它一般加15%甘油。
注意:务必要四区划线挑单菌落培养。
pCMV-SPORT6-PERP(4同义突变)质粒载体常用抗生素推荐浓度:
附表一:
|
简称 |
中文名称 |
溶剂 |
储存浓度 |
大肠工作浓度 |
备注 |
|
Amp |
氨苄青霉素 |
ddH2O |
100mg/ml |
100μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Car |
羧苄青霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Kan |
卡那霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Spe |
壮观霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Gen |
庆大霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Apr |
安普霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Zeo |
博来霉素 |
ddH2O |
100mg/ml |
100μg/ml |
0.22 μm过滤除菌,低盐高PH的培养基 |
|
Blast |
杀稻瘟菌素 |
ddH2O |
10mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌,低盐高PH的培养基 |
|
Hyg |
潮霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Chl |
氯霉素 |
无水乙醇 |
50mg/ml |
50μg/ml |
松弛型质粒可以提高到170μg/ml |
|
Str |
链霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Tet |
|
