产品展厅
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pEnCMV-DPYD-AS1-lncRNA-FLAG-SV40-Neo质粒载体使用说明书
如需该质粒图谱可以联系客服索取，更多质粒请联系我们
亲爱的科研工作者，感谢您信任雅吉生物，我们致力于为大家分享质优价适的质粒，受各种因素影响，我们只保证质粒的关键序列测序正确，不能保证实验效果。请您收到质粒后请务必先转化，再挑取单菌落扩增，不要直接使用。如果您需要即用的大包装质粒或病毒颗粒，可委托我们制备，性价比更高。
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉
产品规格：0.5～2μg质粒干粉，保证能转化出来，不保证具体含量，请务必先转化进感受态，再挑单菌落提取后再使用。
保质期限：90天，请尽快转化。
保存温度：一般在-20°C，置于-80°C保存时间更长。
运输方式：常温运输，1周内。
注意事项：转化前请准确查找该质粒相应的抗性、抗性浓度、感受态名称和培养温度。
使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80°C冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min;
4、42℃热激90s，再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min，仅留100μl上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h～16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
注意：如果平板长的过多，请将质粒稀释后再转化；如果没有长菌落，请取10μl质粒转化。
pEnCMV-MIR1-2-SV40-Neo质粒载体
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
产品规格：甘油菌种。
保质期限：90天，请尽快划线培养。
保存温度：-80℃。
运输方式：冰袋运输，1周内。
注意事项：培养前请准确查找该菌种的抗性、抗性浓度和培养温度。
使用说明：
1、收到甘油菌种后请甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上；
2、用接种环在固体平板上四区划线，如有抗性就加对应抗性；
3、恒温培养箱倒置培养12~16h；
4、挑取单菌落接种于液体培养基中，如有抗性就加对应抗性；
5、摇床震荡培养12~16h，根据实验需要保存甘油菌，酵母加30% 甘油，其它一般加15%甘油。
注意：务必要四区划线挑单菌落培养。
pEnCMV-DPYD-AS1-lncRNA-FLAG-SV40-Neo质粒载体质粒载体
常用抗生素推荐浓度：
附表一：
|
简称 |
中文名称 |
溶剂 |
储存浓度 |
大肠工作浓度 |
备注 |
|
Amp |
氨苄青霉素 |
ddH2O |
100mg/ml |
100μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Car |
羧苄青霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Kan |
卡那霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Spe |
壮观霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Gen |
庆大霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Apr |
安普霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Zeo |
博来霉素 |
ddH2O |
100mg/ml |
100μg/ml |
0.22 μm过滤除菌，低盐高PH的培养基 |
|
Blast |
杀稻瘟菌素 |
ddH2O |
10mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌，低盐高PH的培养基 |
|
Hyg |
潮霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Chl |
氯霉素 |
无水乙醇 |
50mg/ml |
50μg/ml |
松弛型质粒可以提高到170μg/ml |
|
Str |
链霉素 |
ddH2O |
50mg/ml |
50μg/ml |
0.22 μm过滤除菌 |
|
Tet |
四环素 |
无水乙醇 |
10mg/ml |
10μg/ml |
培养基不能含镁离子 |
|
Rif |
利福平 |
DMSO |
50mg/ml |
50μg/ml |
一般用于农杆菌 |
|
Erm |
红霉素 |
无水乙醇 |
200mg/ml |
600μg/ml |
大肠杆菌对红霉素不敏感 |
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