牛病毒性腹泻-粘膜病（Bovine viral diarrhea-mucosal disease ，

BVD-MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea-mucosal disease

virus，BVDV）引起的以粘膜发炎、糜烂、坏死和腹泻等特征为主的疾病。该

病在世界各地广泛流行和传播，一些畜牧业发达的国家尤其严重。因此，BVDV

的快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品是根据 PCR 原

理开发的牛病毒性腹泻病毒检测的试剂盒。它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA 模板。

2. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3. 产品精心优化且特异性高，引物是根据牛病毒性腹泻病毒 RNA 高度保守区

设计，不会跟除此之外的其它病毒 RNA 发生交叉反应。

4. RT-PCR mix 中含上样染料，扩增反应后可以直接上样电泳。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 PCR 反应。

6. 本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成 份

编号

五孔盒包装

2×RT-PCR Buffer

91202A

500 μL（棕色管）

20×RT Enzyme Mix

91202B

50 μL（红盖）

超纯水

100935

1 mL（白盖）

牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 引物混

合液

13-59800yw

100 μL（绿盖）

牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 阳性对

照

（1×10E6 拷贝/μL）

59800pc

50 μL（黄盖）

使用手册

13-59800sc

1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一

的核酸片段作为阳性对照。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂 样品 DNA

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取反应，多出的两个中一个是 PC（样

品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 牛病毒

性腹泻病毒 PCR 阳性对照（1×10E6 拷贝/μL，本试剂盒提供）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多

少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。

2. 用自选方法纯化上述 N+2 个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌

DNA 提取试剂盒兼容。

二、设置 PCR 反应（

20μL 体系）

3. 标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 DNA 样品，额外增加

的两个管一个用于 PCR 阳性对照，另一个用于 PCR 阴性对照。按照下表

在各 PCR 管中加入下列成分：

成分/每管

样品管

N+2 个

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

2×RT-PCR Buffer

10 μL

10 μL

10 μL

牛病毒性腹泻病毒 PCR 引物混合

液

2 μL

2 μL

2 μL

制备的 N+2 个 DNA 样品

7 μL

-

-

超纯水

-

7 μL

-

牛病毒性腹泻病毒 PCR 阳性对照

的 10 倍稀释液

-

-

7 μL

20×RT Enzyme Mix

1 μL

1 μL

1 μL

4. 上机进行 PCR，PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

逆转录

50℃

20 min

预变性

95℃

10 min

PCR 反应

（40 个循环）

95℃

15 sec

60℃

60 sec

延伸

72℃

10 min

三、电泳分析

5. 取 5-10uL 扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物

较短，建议用 1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为 220bp 左右。如果两个阴性对照（样

品制备阴性对照或 PCR 阴性对照）有此扩增产物，说明环境污染，则整个

实验无效，不需要分析实验结果。

7. 如果所有样品和 PCR 阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题（试剂、设备、程序、操作等），需要重复并排查原因。

8. 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2 个

样品中有扩增产物的判定为阳性，无则判定为阴性